怎樣凍存
動(dòng)物細(xì)胞株？一個(gè)實(shí)驗(yàn)室得到一個(gè)新的細(xì)胞株后，首先要把該細(xì)胞株培養(yǎng)擴(kuò)增后凍存起來(lái)。細(xì)胞凍存首先可以在由于污染等情況丟失細(xì)胞時(shí)有備份可用，另外幾乎所有細(xì)胞在培養(yǎng)傳代的過(guò)程中發(fā)生一定程度的變異，為了保持實(shí)驗(yàn)結(jié)果的一致，一般細(xì)胞在培養(yǎng)幾十代以后就不能再使用了，需要將凍存的，傳代較少的細(xì)胞化凍培養(yǎng)再使用。
細(xì)胞冷凍過(guò)程有四個(gè)要點(diǎn)：細(xì)胞的收獲、保護(hù)劑的使用、冷凍速率和儲(chǔ)存環(huán)境。
一、細(xì)胞的收獲
用來(lái)凍存的細(xì)胞一般選擇在細(xì)胞約鋪滿90%的時(shí)候，這時(shí)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)好，細(xì)胞數(shù)量也多，并且在收獲細(xì)胞前24小時(shí)換一次培養(yǎng)液。收獲用來(lái)凍存的細(xì)胞開(kāi)始時(shí)方法和平時(shí)一樣，用100xg離心5分鐘收集細(xì)胞再重懸，活細(xì)胞記數(shù)。
稀釋或濃縮到細(xì)胞保存的細(xì)胞濃度的二倍（一般是400-1000萬(wàn)細(xì)胞/ml），加入已經(jīng)配好的等體積的培養(yǎng)液保護(hù)劑混合溶液中輕輕混勻，分裝到凍存管，冷凍保存。
二、保護(hù)劑的使用
細(xì)胞凍存中，一般使用DMSO作為保護(hù)劑。在動(dòng)物細(xì)胞株凍存中，DMSO使用的濃度一般是5-15%，某種具體細(xì)胞的凍存液中的DMSO濃度可以從ATCC查到。
對(duì)特別敏感的細(xì)胞特別是雜交瘤細(xì)胞在凍存時(shí)使用95%血清和5%DMSO可能會(huì)好些。保護(hù)劑在使用時(shí)先用培養(yǎng)液或血清配成濃度的2倍，再與等體積的懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)液混合。
三、細(xì)胞凍存的速率
動(dòng)物細(xì)胞株的冷凍速率適控制在讓細(xì)胞有足夠的時(shí)間脫水而又不被過(guò)度脫水導(dǎo)致細(xì)胞損害。對(duì)大多數(shù)細(xì)胞來(lái)說(shuō)，每分鐘降1至3℃是合適的。通常的操作是把細(xì)胞先在-20℃1-2個(gè)小時(shí)，再放入-80℃冰箱過(guò)夜（如果沒(méi)有-80℃冰箱，可以用干冰替代），再轉(zhuǎn)入液氮罐或低于-130℃的冰箱長(zhǎng)期保存。
四、儲(chǔ)存環(huán)境
細(xì)胞長(zhǎng)期保存溫度是-130℃或更低。液氮罐中氣態(tài)層溫度在-140℃至-180℃之間，動(dòng)物細(xì)胞株可保存在氣態(tài)層或浸入液氮中，如果可能保存在氣態(tài)層，因?yàn)檫@樣可避免由于有液氮進(jìn)入凍存管而在拿出細(xì)胞時(shí)引起爆炸（但是這樣液氮罐內(nèi)只能存儲(chǔ)少量液氮，需要經(jīng)常添加）。細(xì)胞也可以在-80℃冰箱保存幾個(gè)月左右的時(shí)間。
