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ELISA與化學(xué)發(fā)光法測(cè)尿微量白蛋白臨床評(píng)價(jià)
更新時(shí)間:2013-10-08   點(diǎn)擊次數(shù):1390次

        尿微量白蛋白(MAU)是指尿中白蛋白含量超出健康人參考范圍,但不能用常規(guī)的方法檢測(cè)出這種微量的變化。為了使這一檢測(cè)指標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)化,上采用白蛋白分泌率表示尿中白蛋白的排出量。健康人MAU在<20~30mg/24h(或<20~30μg/min)的范圍內(nèi);MAU在20~300μg/24h時(shí)稱其為MAU;MAU>300mg/24h時(shí)稱其為大量白蛋白尿。MAU排出量增加是疾病早期的改變,對(duì)疾病的早期診斷,早期治療有重要的參考價(jià)值和臨床意義[1]。大量的臨床研究表明MAU是預(yù)測(cè)糖尿病、高血壓、心血管疾病血管損傷的敏感指標(biāo)。目前上十分重視MAU的測(cè)定,認(rèn)為這項(xiàng)指標(biāo)對(duì)早期治療原發(fā)病、分析病程進(jìn)展、評(píng)價(jià)相關(guān)危險(xiǎn)因素具有重要意義[2]。本文分別用ELISA法和化學(xué)發(fā)光法測(cè)定尿微量白蛋白濃度,對(duì)其結(jié)果進(jìn)行比較,并比較其優(yōu)缺點(diǎn),從而評(píng)價(jià)ELISA法的臨床適用性。

       1 材料與方法
1.1 對(duì)象
115位患者,年齡在32~73歲之間平均(50.8±7.1)歲。都是臨床初步診斷疑為腎病、糖尿病、風(fēng)濕病及心血管病等等不同類型的患者。
1.2 標(biāo)本采集及處理  
取每位患者的晨尿4~5ml于冰箱4~8℃保存,收集至115份標(biāo)本之后,1周之內(nèi)同時(shí)采用2種方法測(cè)定。
1.3 試劑與儀器
        美國DPC公司生產(chǎn)的IMMULITE型全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光分析儀;ELX—800酶標(biāo)儀(美國BIO-TEK);洗板機(jī)(BIO-RAD,MODEL1575)。
化學(xué)發(fā)光法試劑為:美國DPC公司生產(chǎn)的YZB/USA 2153-40 白蛋白試劑盒; ELISA法 :上海伊麗薩生物科技有限公司供應(yīng)的 尿微量白蛋白ELISA試劑盒。
1.4 方法
1.4.1 化學(xué)發(fā)光法:嚴(yán)格按照美國DPC公司生產(chǎn)的 白蛋白試劑盒 操作手冊(cè)進(jìn)行。
1.4.2 ELISA 法:嚴(yán)格按照尿微量白蛋白ELISA試劑盒的操作手冊(cè)進(jìn)行。
1.4.3 測(cè)定分析:用上述兩種方法對(duì)上述115份患者尿標(biāo)本微量白蛋白濃度進(jìn)行測(cè)量,分別在ELX—800酶標(biāo)儀上和全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光分析儀上直接讀取結(jié)果。
1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn):采用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件,檢測(cè)數(shù)據(jù)表示用x±s,組間數(shù)據(jù)比較用t檢驗(yàn),變量間的變化采用相關(guān)性分析。

2 結(jié)果
為了評(píng)價(jià)ELISA法測(cè)定尿微量白蛋白的準(zhǔn)確性,我們采用雙盲的方法與化學(xué)發(fā)光法進(jìn)行比較.收集115例病人尿樣分別使用ELISA方法和化學(xué)發(fā)光法進(jìn)行測(cè)定, 化學(xué)發(fā)光法測(cè)定的平均值為10.39 mg/L,ELISA法測(cè)定的平均值為10.56mg/L,統(tǒng)計(jì)學(xué)線性回歸分析顯示相關(guān)系數(shù)r值為0.994。二者有較好的相關(guān)性.且P>0.05,即可以認(rèn)為用ELISA測(cè)定的尿微量蛋白結(jié)果與化學(xué)發(fā)光測(cè)定結(jié)果沒有明顯差異。

3 討論
白蛋白是血漿白蛋白,由肝臟產(chǎn)生[3],分子量為66KD,半徑約為3.6nm,在血漿環(huán)境中帶負(fù)電荷,不易通過腎小球基底膜的孔徑屏障和電荷屏障,而原尿中的白蛋白在腎小管幾乎全部被重吸收,所以每日排出量僅10~30mg,常規(guī)干化學(xué)定量測(cè)定尿蛋白為陰性,故臨床習(xí)慣稱正常尿中無蛋白[4]。當(dāng)腎臟發(fā)生早期損害時(shí),由于腎小球毛細(xì)管滲透性和血管壁成分的改變,白蛋白可通過腎小球基底膜滲透到尿液中,尿中白蛋白排泄明顯高于正常,其濃度通常在20~200mg/L之間,于是形成了微量白蛋白尿[5]。通常用常規(guī)方法難以檢出,而當(dāng)病變發(fā)展到尿常規(guī)蛋白測(cè)定結(jié)果為陽性時(shí),腎臟的損傷往往已達(dá)到不可恢復(fù)的階段[6]。近年來許多研究表明尿微量白蛋白不僅是糖尿病腎病的預(yù)測(cè)指標(biāo),也是心血管疾病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素[7],所以檢測(cè)尿微量白蛋白有重要的臨床價(jià)值。本文分別用ELISA法和化學(xué)發(fā)光法測(cè)定尿微量白蛋白濃度,對(duì)其結(jié)果進(jìn)行比較,并比較其優(yōu)缺點(diǎn),從而評(píng)價(jià)ELISA法的臨床適用性。
微量白蛋白尿的臨床應(yīng)用廣泛,微量白蛋白尿是反映腎臟疾病和損傷的一個(gè)非常靈敏的指標(biāo),在預(yù)示糖尿病、腎病方面已使用多年。近年有資料顯示,微量白蛋白尿也是非糖尿病患者心血管疾病發(fā)病的一個(gè)危險(xiǎn)因子,受到廣泛重視。
目前,已出現(xiàn)多種檢測(cè)尿中微量白蛋白的方法,如化學(xué)發(fā)光法、放射免疫法、試條半定量法、免疫比濁法等。因此,本文主要探討ELISA法檢測(cè)尿微量白蛋白的優(yōu)缺點(diǎn)。化學(xué)發(fā)光法雖具有高靈敏度、高準(zhǔn)確度、高精密度、寬線性、反應(yīng)快速,影響因素少,結(jié)果準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn),但化學(xué)發(fā)光法的缺點(diǎn)是儀器、試劑成本高,給患者帶來的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)相對(duì)較重。而ELISA法設(shè)備簡單,易于開展,收費(fèi)低廉,可用臨床普查,還具有簡便易行,不污染環(huán)境等優(yōu)點(diǎn)。本文檢測(cè)結(jié)果與化學(xué)發(fā)光法同樣準(zhǔn)確,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),相關(guān)性良好(r=0.994),所以 ELISA法測(cè)定尿微量白蛋白具有經(jīng)濟(jì)、實(shí)用的特點(diǎn)[8],因此ELISA法更適用于臨床,應(yīng)得到普遍推廣。

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