蛋白定量是生物學(xué)實(shí)驗(yàn)*的一部分。我們在進(jìn)行蛋白質(zhì)的許多實(shí)驗(yàn)分析之前都是需要對蛋白質(zhì)的濃度進(jìn)行測定，以便確定下游實(shí)驗(yàn)是否能順利進(jìn)行。
蛋白試劑盒是常用的蛋白濃度檢測方法之一。該方法原理是蛋白質(zhì)在堿性條件中將銅離子（Cu2+）還原為亞銅離子（Cu+），生成的Cu+與BCA形成紫色絡(luò)合物，并在562nm處具有很強(qiáng)的吸收峰，吸光值與樣品中蛋白質(zhì)的含量成正比，根據(jù)吸光值可以推算出蛋白濃度。
通常蛋白定量常使用的方法是比色法，通常用于總蛋白的定量分析。根據(jù)蛋白和比色試劑的結(jié)合，可以將比色法分為：蛋白-染料結(jié)合法和蛋白-銅螯合化學(xué)試劑法。
典型的蛋白試劑盒比色法是考馬斯亮藍(lán)G250染料結(jié)合法，后者則包括雙縮脲法，Lowry法，二喹啉甲酸（BCA）法。
1、Bradford法
考馬斯亮藍(lán)G250染料結(jié)合法由MarionBardford博士在1976年提出，因此也叫Bradford法，原理是蛋白在酸性條件下和考馬斯染料結(jié)合，染料的吸收值發(fā)生改變，從465nm轉(zhuǎn)移為610nm，并且在595nm處有的吸收差異。
結(jié)合到蛋白質(zhì)分子上的染料數(shù)與蛋白所帶正電荷成正比，因此可以用該方法來對蛋白進(jìn)行定量。染料的顏色變化和蛋白中的堿性氨基酸有關(guān)，另外范德華力和疏水作用也會(huì)影響蛋白與染料的結(jié)合。
2、BCA法
1985年P(guān)aulK.Smith等人開發(fā)出BCA方法，該方法分為兩步：首先，在堿性條件下，蛋白將二價(jià)銅離子還原為一價(jià)銅離子，然后，BCA和一價(jià)銅離子結(jié)合，形成紫色化合物，該化合物在562nm時(shí)有吸收，且吸收值與蛋白濃度呈線性相關(guān)。
